Lilo ati awọn iṣọra ti tube centrifuge ultrafiltration
1) Yan tube ultrafiltration ti o yẹ.Ṣe akiyesi pe awọn membran UF yatọ ni ipele ifarada wọn si ọpọlọpọ awọn kemikali.Ni deede, awọn tubes ultrafiltration pẹlu gige iwuwo molikula 10 kDa ni a le yan pẹlu gige iwuwo molikula ti ko yẹ ki o tobi ju 1/3 ti iwuwo molikula ti amuaradagba ti iwulo, bii 35 kDa.Ti iwuwo molikula ti amuaradagba ti iwulo ba wa ni ayika 10 kd, tube ultrafiltration kan pẹlu gige iwuwo molikula ti 3 KD le ṣee lo.
(2) Awọn ultrafiltration, ti ra titun, ti gbẹ, pẹlu omi ultrapure ti a fi kun ṣaaju lilo ati omi ti o kọja patapata nipasẹ awọ ara ilu, iwẹ yinyin tabi firiji ṣaaju tutu fun iṣẹju diẹ.Lẹhinna a da omi naa kuro, ie omi amuaradagba, ati iye ti a fi kun, eyikeyi ti ko ju laini funfun lọ ni oke tube naa.Iṣiṣẹ naa jẹ ina, ati tube ultrafiltration nilo lati wa ni tutu lori yinyin ṣaaju fifi ojutu amuaradagba kun.
3) Mejeeji ibi-ati aarin ti walẹ ni lati de iwọntunwọnsi.Ṣe akiyesi iyara iyipo ati isare ko yara pupọ, bibẹẹkọ taara ba awọna ultrafiltration jẹ.Centrifugal ultrafiltration ti bẹrẹ (centrifuge precooled si awọn iwọn 4).Lẹhin ti RPM ti oriṣiriṣi centrifuges ti yipada si g, o yatọ.Isare ti centrifuge ti ni atunṣe si o kere ju, idinku titẹ lori awo ilu.Akiyesi, rii daju lati lọ kuro ni centrifuge lẹhin ti centrifuge ti de iyara ibi-ajo rẹ, tabi ti o ba ni iṣoro, o ko le mu u fun igba akọkọ.Iṣalaye ti awo ilu si spindle ni a tunse ni ibamu si awọn ilana (ọran centrifuge angula jẹ awo ilu si axis papẹndikula).Ni lilo iṣe, iyara yiyi gbogbogbo jẹ kekere ju ti o wa ninu awọn itọnisọna, ki igbesi aye tube centrifuge le fa siwaju sii.
3) Mejeeji ibi-ati aarin ti walẹ ni lati de iwọntunwọnsi.Ṣe akiyesi iyara iyipo ati isare ko yara pupọ, bibẹẹkọ taara ba awọna ultrafiltration jẹ.Centrifugal ultrafiltration ti bẹrẹ (centrifuge precooled si awọn iwọn 4).Lẹhin ti RPM ti oriṣiriṣi centrifuges ti yipada si g, o yatọ.Isare ti centrifuge ni atunṣe si o kere ju, idinku titẹ lori awo ilu.Akiyesi, rii daju lati lọ kuro ni centrifuge lẹhin ti centrifuge ti de iyara ibi-ajo rẹ, tabi ti o ba ni iṣoro, o ko le mu u fun igba akọkọ.Iṣalaye ti awo ilu si spindle ni a tunse ni ibamu si awọn ilana (ọran centrifuge angula jẹ awo ilu si axis papẹndikula).Ni lilo iṣe, iyara yiyi gbogbogbo jẹ kekere ju ti o wa ninu awọn itọnisọna, ki igbesi aye tube centrifuge le fa siwaju sii.
(4) Nigbati o ba ni idojukọ si 1 milimita ti o ku, mu 50ul ti ojutu ifipamọ, ṣafikun 10ul ti sisan nipasẹ ki o rii boya eyikeyi awọ buluu, bi idajọ boya tube ultrafiltration ti nsọnu amuaradagba.Ti tube ba n jo, tun tú ipele oke ati ṣiṣan sinu tube tuntun lati bẹrẹ ultrafiltration.Lati pinnu ni pato ti awọn tubes ba padanu, centrifuge fun 10min pẹlu 5mgml ti BSA ṣaaju ṣiṣan, nṣiṣẹ lori lẹ pọ amuaradagba, tabi Bradford crude assay, ati tẹsiwaju nipa fifi ojutu amuaradagba ogidi ti o ku (eyiti o nṣiṣẹ lori yinyin ati idilọwọ awọn ọlọjẹ lati alapapo) titi di igba. gbogbo awọn ti awọn idojukọ ti a ti fi kun.Ṣe abojuto lakoko centrifugation ti ojoriro ti awọn ọlọjẹ ba waye, ti o yori si pipade tube.Ti ojoriro ba waye, pinnu boya idi pataki ti ojoriro jẹ ifọkansi amuaradagba ti o pọju tabi ifipamọ ti ko yẹ;Awọn tele le ti wa ni re nipa ultrafiltration ti ọpọ ultrafiltration Falopiani nigbakanna, dindinku fojusi, ati awọn igbehin nipa paarọ awọn ti o yatọ si saarin solusan titi ko si ojoriro ti awọn amuaradagba waye.
(4) Nigbati o ba ni idojukọ si 1 milimita ti o ku, mu 50ul ti ojutu ifipamọ, ṣafikun 10ul ti sisan nipasẹ ki o rii boya eyikeyi awọ buluu, bi idajọ boya tube ultrafiltration ti nsọnu amuaradagba.Ti tube ba n jo, tun tú ipele oke ati ṣiṣan sinu tube tuntun lati bẹrẹ ultrafiltration.Lati pinnu ni pato ti awọn tubes ba padanu, centrifuge fun 10min pẹlu 5mgml ti BSA ṣaaju ṣiṣan, nṣiṣẹ lori lẹ pọ amuaradagba, tabi Bradford crude assay, ati tẹsiwaju nipa fifi ojutu amuaradagba ogidi ti o ku (eyiti o nṣiṣẹ lori yinyin ati idilọwọ awọn ọlọjẹ lati alapapo) titi di igba. gbogbo awọn ti awọn idojukọ ti a ti fi kun.Ṣe abojuto lakoko centrifugation ti ojoriro ti awọn ọlọjẹ ba waye, ti o yori si pipade tube.Ti ojoriro ba waye, pinnu boya idi pataki ti ojoriro jẹ ifọkansi amuaradagba ti o pọju tabi ifipamọ ti ko yẹ;Awọn tele le ti wa ni re nipa ultrafiltration ti ọpọ ultrafiltration Falopiani nigbakanna, dindinku fojusi, ati awọn igbehin nipa paarọ awọn ti o yatọ si saarin solusan titi ko si ojoriro ti awọn amuaradagba waye.
(5) Awọn igbesẹ diẹ akọkọ ni a lo lati ṣojumọ amuaradagba, ati pe ti o ba fẹ yipada, rọra fi ifipamọ tuntun kun (ultrafiltration nipasẹ awo awọ 0.22um ultrafiltration) si bii 1ml ti amuaradagba lapapọ, ki o tunkọ si bii 1ml fun mẹta. awọn akoko itẹlera, pẹlu iwọn ipari ogidi ipari ti o da lori ifọkansi amuaradagba ti o fẹ, ni gbogbogbo kii ṣe ju 500ul, ṣugbọn tun si laarin 200ul.Ṣe aṣeyọri 1000 × tabi diẹ sii ni awọn iṣẹlẹ mẹta, pataki bi iyipada ifipamọ pupọ, bi iṣiro nipasẹ o kere ju 10 × tabi diẹ ẹ sii imudara iwọn didun ni igba kọọkan.
(5) Awọn igbesẹ diẹ akọkọ ni a lo lati ṣojumọ amuaradagba, ati pe ti o ba fẹ yipada, rọra fi ifipamọ tuntun kun (ultrafiltration nipasẹ awo awọ 0.22um ultrafiltration) si bii 1ml ti amuaradagba lapapọ, ki o tunkọ si bii 1ml fun mẹta. awọn akoko itẹlera, pẹlu iwọn ipari ogidi ipari ti o da lori ifọkansi amuaradagba ti o fẹ, ni gbogbogbo kii ṣe ju 500ul, ṣugbọn tun si laarin 200ul.Ṣe aṣeyọri 1000 × tabi diẹ sii ni awọn iṣẹlẹ mẹta, pataki bi iyipada ifipamọ pupọ, bi iṣiro nipasẹ o kere ju 10 × tabi diẹ ẹ sii imudara iwọn didun ni igba kọọkan.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu kọkanla-09-2022